反相液相色譜柱原理及運用維護介紹
反相液相色譜柱原理介紹
反相液相色譜柱是根據溶質、極性活動相和非極性固定相表面間的疏水效應建立的一種色譜形式，任何一種有機分子的結構中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在液相色譜中這是運用面較廣的一種別離形式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，活動相多選用酸性的、低離子強度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機改性劑，很多運用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少數高聚物微球。
反相液相色譜柱的運用和維護
在日常別離剖析工作中，反相液相色譜柱的正確運用和維護十分重要，色譜柱運用是否妥當，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會下降柱效、縮短運用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需求留意下列問題，以維護色譜柱。
(1)柱子在裝卸、替換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，避免柱床產生空地。
(2)假如儀器用來做慣例剖析，樣品種類有限，但剖析次數多，則不妨為每一類慣例剖析配置一根專用柱，這樣有助于延伸柱子的壽命。
(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械轟動。溫度的忽然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的忽然升高或下降也會沖動柱內填料，因此在調理流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。
(4)應逐
漸改動溶劑的組成，特別是反相色譜中，不該直接從有機溶劑改動為全部是水，反之亦然。
(5)如運用柱溫操控設備時，應留意在通人活動相后才干升溫。
(6)一般說來反相液相色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱能夠反沖時，才能夠反沖除掉留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速下降柱效。
(7)選擇運用適合的活動相，以避免固定相被破壞。有時能夠在進樣器前面連接一個預柱，剖析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使活動相在進入剖析柱之前預先被硅膠“飽滿”，避免剖析柱中的硅膠基質被溶解。
8)避免將基質復雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內，需求對樣品進行預處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一個維護柱。維護柱一般是填有類似固定相的短柱。維護柱能夠并且應該經常替換。
(9)經常用強溶劑沖刷色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路體系中活動相的置換應以相混溶的溶劑逐步過渡，每種活動相的體積應是柱體積的20倍左右，即慣例剖析需求50-75mL。
(10)保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
(11)反相液相色譜柱運用過程中，假如壓力升高，一種或許是燒結濾片被堵塞，這時應替換濾片或將其取出進行清洗；另一種或許是大分子進人柱內，使柱頭被污染；假如柱效下降或色譜峰變形，則或許柱頭出現塌陷，死體積增大。
(12)在完成別離剖析工作之后，不該當即停機，需及時對色譜剖析體系進行沖刷，一般0.5h以上，以除掉色譜柱內的雜質。
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