等電聚焦電泳色譜儀pH值梯度不穩定可能的七種原因
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時間:2018-12-17 16:47:19
等電聚焦電泳色譜儀是利用蛋白質分子或其它兩性分子的等電點不同,在一個穩定的、連續的、線性的pH梯度中進行分離。等電聚焦電泳技術在不斷進步,卻一直存在著pH值梯度不穩定的現象,即存在著pH梯度的陰極和陽極漂移現象。陰極漂移是指在等電聚焦電泳中pH梯度的堿性端逐漸消失的過程。反之,如果其酸性端逐漸消失則稱為陽極漂移。
等電聚焦電泳(IFE,isoelectric focusing electrophoresis)是一種電泳方法,即利用一種特殊的緩沖液(兩性電解質)在凝膠(常用聚丙烯酰胺凝膠)內制造一個pH梯度,電泳時每種蛋白質就將遷移到等于其等電點(pI)的pH處(此時此蛋白質不再帶有凈的正或負電荷),形成一個很窄的區帶。

為了闡明等電聚焦電泳中pH值梯度不穩定的機制,提出了各種假說:
一、載體兩性電解質向陰、陽極的等速電泳遷移。
二、在陰極因CO2的吸附而引起陰極液組分和濃度的變化。
三、在pH梯度的中性區域生成一段純水,水的等電聚焦導致水在電泳柱中的聚集并向兩端反流。
四、不同等電點的載體兩性電解質的選擇性缺陷而引起不穩定。
五、載體兩性電解質帶電配體的結合或分離而引起不穩定。
六、載體兩性電解質相互反應的存在而引起不穩定。
七、相對遷移的氫離子和氫氧根離子濃度的不平衡。
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