高效液相色譜（1）-Agilent1100HPLC的正確使用和科學保養
HPLC的正確使用和科學保養
1、保持貯液瓶清潔，對專用貯液瓶應定期清洗；用試劑瓶作貯液瓶時，要經常更換。
2、定期（如半個月）在稀硝酸溶液中超聲、清洗過濾器，保持過濾器暢通無阻。
3、使用HPLC試劑和新蒸二次蒸餾水作流動相，所使用的溶劑其截止波長一定要低于檢測波長，對不是HPLC級的試劑要進行過濾（HPLC試劑出廠前已用0.02μm濾膜過濾）。對流動相一定要脫氣。
4、每天開始使用儀器，注意放空排氣，確保泵頭、流動池以及其它流路系統中無氣泡存在。
5、珍惜保護色譜柱，避免柱頭突然產生大的波動，擾動損傷柱床。如避免泵啟動過速、升壓過快、樣品閥搬動過慢所造成的柱壓大的波動。
6、采用保護（警戒）柱，延長柱壽命。如污染物堆積于保護柱柱頭，造成柱壓升高，柱效下降，峰形變差時，卸下用強溶劑反沖后再用或更換新保護柱。
7、避免超負荷進樣，對250×4.6mm的柱子,絕對進樣量應不超過100μg。在靈敏度允許的前提下，應盡量將試樣濃度降低，減少絕對進樣量（進樣體積可保持不變），這是保持HPLC柱性能持久良好的重要舉措之一。
8、經常用強溶劑沖洗柱子，將柱內強保留組分及時洗脫出。反相柱用異丙醇--二氯甲烷（1：1）沖洗，正相（硅膠柱）用純甲醇或異丙醇沖洗，時間均不少于1h。
9、做完試驗，及時用適當溶劑沖洗柱子和進樣閥，尤其是對過夜的柱子和進樣閥，一定要用足量的水徹底洗凈其中的鹽類、緩沖液，再用甲醇或乙腈沖洗，并保存在乙腈中。正相柱保存在非極性有機溶劑（如己烷）中。
10、以硅膠為基質的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流動相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。
11、盡量用流動相溶解樣品，一是避免出現拖尾峰、怪峰，二是避免試樣在系統中由于溶解度降低而析出。
12、對于阻塞或受傷嚴重的柱子，必要時，可卸下不銹鋼濾板，超聲洗去濾板阻塞物，對塌陷污染的柱床進行清除、填充、修補工作，此舉可使柱效恢復到一定程度（80%），有繼續使用的價值。
13、色譜儀檢測器輸出與積分儀（處理機）要匹配，要合理設置參數如斜率、半峰寬、閾值、AUFS值、衰減等。將適宜的進樣量和合適的參數結合起來，使主峰峰高達到記錄儀滿量程的80%左右。
14、用HPLC分析酸堿性物質，由于吸附作用（次級保留）使峰開拖尾。加入改良劑可以大大改善峰形，提高積分的準確度。一般規則是：（1）分析酸性物質，可加入1%有醋酸。（2）分析堿性物質，10-20mmol/L三乙胺。（3）酸堿物質混為一體，可同時加入1%的醋酸和10-20mmol/L三乙胺
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