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液相色譜聚合色譜柱的再生方法

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時間:2019-07-25 10:21:56

液相色譜儀因其對沸點低的高分子化合物的精度較高,在生物醫藥行業有較為廣泛的應用。用來別離生物分子的聚合柱長期運用會被污染,然后較低柱效,影響檢測的速率和靈敏度。因此,須定時進行清潔。

聚合資料的化學穩定性通常以作用力來衡量。一般情況下,首要運用硝酸或氫氧化鈉溶液來清洗。一些反相聚合色譜柱的清洗辦法如用聚苯乙烯-二乙烯基苯小球和聚合單體,如CIM RP-SDVB片和Swift柱子,能耐寬的pH規模(通常pH11~13或有時pH0~14),但運用者用強有機溶劑沖刷柱子時要注意,由其交聯度決定,當柱子用某些有機溶劑沖刷時就會脹大或縮短。高于8~10%交聯度的聚合物通常有較好的機械性能在水溶液中縮短很少,在有機溶劑中脹大也不大。

再生聚苯乙烯-二乙烯基苯全體柱的辦法如下:運用含0.1%的2-丙醇在一半作業流速下沖刷10個柱體積以上;100%流動相B在作業流速一半的條件下沖刷5個柱體積以上;用100%流動相A在作業流速下至少平衡10個體積以上。

含有丁基和乙基化學物質甲基丙烯酸酯全體柱的清洗辦法,清洗液相色譜硅膠鍵合反相柱上的蛋白質殘留可以通過按順序反向沖刷10個柱體積的氫氧化鈉、水、20%乙醇溶液和作業緩沖液來鏟除。如果有很多疏水蛋白質,運用者應該在水今后插入一個30%異丙醇或70%乙醇的過程。

如果要清洗或滅活微生物菌落,聚苯乙烯-二乙烯基苯可以用0.5~1.0M的氫氧化鈉完全清洗。全體柱在室溫下至少要用氫氧化鈉洗一個小時。

用傳統聚合基質裝填的柱子來別離一些溶解度很小的蛋白質如膜蛋白、結構蛋白、和病毒外殼蛋白等需要用較強的清洗條件。例如含3M鹽酸胍的50%異丙醇溶液在60℃才能把這些蛋白質除去。

在固相樹脂中去除合成肽能產生從頭激活被苯甲醚和苯硫基甲烷鏟除的正離子。鏟除正離子反應產生了大的芳香族分子,這些芳香族分子會在肽純化時污染柱子。這種污染物在C18色譜柱子上有非常高的保留沒法被100%的甲醇或乙晴洗出。要清洗這類柱子,必須把柱子反向用5體積100%異丙醇,三到五個體積二氯甲烷,然后三到五體積異丙醇,zui后到初始溶劑體系。芳香族不純物的洗脫可以通過260nm紫外檢測。




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